• 新疆铁路货运单日装车突破7000车大关 2019-04-09
  • 端午小长假杭州接待游客454.8万人次 9成民宿预订一空 2019-04-02
  • 溃疡恶变也会腹痛 这些肿瘤最容易被误诊 2019-03-27
  • 为藏药材可持续发展垦出“良田沃土” 2019-03-27
  • 吴尊送儿子上学晒自拍 父子颜值超高Max笑容灿烂 2019-03-24
  • 月薪3000男会计豪掷930万打赏 女主播该退钱吗? 2019-03-23
  • 我国成功组织航天员沙漠野外生存训练 2019-03-23
  • 网红健康险——红在哪 险在哪 2019-03-18
  • 升级是硬道理 MQB平台全新一代宝来驾乘体验更舒适 2019-03-18
  • 马特乌斯评德国队首战失利:“几乎什么都欠缺” 2019-03-02
  • 世界自然遗产旅行地中国国家地理网 2019-03-02
  • 计划经济走向完美,看搞好公有制计划经济存在不好说来看看?是统得太死还是要这样做才科学? 2019-02-17
  • 马思纯《我是大侦探》送礼物 吴磊:我们大老爷们好糙啊 2019-02-17
  • 回复@海之宁:不给你分配生产资料你咋尽所能? 2019-01-28
  • Conférence de presse du Premier ministre chinois 2019-01-28
  • 外泌体研究方法:机理研究or分子标志物研究

    众所周知,外泌体在很多生理病理上起着重要的作用,如免疫中抗原呈递、肿瘤的生长与迁移、组织损伤的修复等;同时,外泌体与疾病诊断、预后等密切相关,因此也可以作为分子标志物;当然,外泌体经过一定修饰后,可作为载体将包裹在其内的药物/货物运送到特定靶标组织或区域。

    下面我们来为大家分别介绍2篇近期发表的外泌体小RNA测序研究方法,一个方法是为机制机理研究方向,另一外泌体研究方法为分子标志物研究方向。

    外泌体研究方法:【文献一】

     

    该研究由南京大学医学院附属鼓楼医院的学者完成,题目:间充质基质细胞来源的外泌体通过miR-182调节巨噬细胞极化减弱心肌缺血再灌注损伤。

    研究背景

    间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)逐渐成为调节心脏炎症的有力候选者,MSCs分泌的外泌体可能是心肌梗死后MSCs移植起作用的新机制。作者探讨了MSC来源外泌体(MSC-Exo)在心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)后巨噬细胞免疫调节中的作用及其在心脏损伤修复中的意义。

    主要研究方法

    使用梯度离心法从MSC的上清液中分离外泌体(MSC-Exo);

    在心肌缺血/再灌注(I/R)之前和之后24小时施用巨噬细胞清除剂-二氯亚甲基二膦酸盐(Cl2MDP)脂质体,再灌注后0h立即递送MSC-Exo或PBS在至心肌。检测梗塞面积以及心脏和血清中的炎症水平等;

    流式细胞检测分析巨噬细胞M1和M2比例;

    MSC-Exo miRNA测序分析鉴定巨噬细胞极化的有效候选分子和其靶基因。

    研究结果

    在心肌I/R后通过心肌内注射给小鼠施用MSC-Exo减少了梗塞面积并减轻了心脏和血清中的炎症水平;

    用巨噬细胞清除剂-二氯亚甲基二膦酸盐(Cl2MDP)脂质体消除了MSC-Exo的疗效;

    MSC-Exo在体内和体外均调节促炎的M1巨噬细胞向抗炎的M2巨噬细胞极化;

    MSC-Exo-miRNA-seq揭示miR-182可能作为巨噬细胞极化的有效候选介质,以及其下游靶基因TLR4。敲低MSC-Exo中miR-182部分减弱其对巨噬细胞极化的调节,TLR4的敲低也赋予心肌I/R小鼠模型中的心脏?;すπР⒔档脱字⑺?。

     

    外泌体研究方法:【文献二】

     

    该研究由中央民族大学生命与环境科学学院/转化神经科学研究中心负责人程勇教授领导课题组完成,题目:全基因组整合分析提示精神分裂症外泌体来源的miRNA失调。

    研究背景

    精神分裂症(schizophrenia,SCZ)风险相关的遗传变异已经被广泛研究了,但是SCZ相关的转录后机制尚未得到很好的研究。并且这些遗传变异通常是微效的。除遗传因素外,越来越多的证据表明表观遗传学可能参与SCZ的发病机制。已知的表观遗传标记中,microRNAs(miRNAs)在过去十年中备受关注,已被证明在神经发育和中枢神经系统的维持中发挥关键作用,例如神经分化、突触可塑性和认知功能。以往的研究提示miRNA可作为各种神经精神疾病的潜在生物标志物。

    方法和结果

    1、miRNA筛?。?/p>

    血清exo-miRNA-seq,49个第一次发作未用药的SCZ患者?vs?46个HC对照;

    1)training set:23个SCZ患者?vs?23个HC对照,鉴定高表达(TPM≥10)的、显著差异表达(FDR<0.05)且差异倍数较高(FC≥2)DEmiRNAs:hsa-miR-206、hsa-miR-145-5p和hsa-miR-133a-3p。

    2)testing set:26个SCZ患者?vs?23个HC对照,鉴定高表达(TPM≥10)的、显著差异表达(FDR<0.05)且差异倍数较高(FC≥2)DEmiRNAs共计7个,包括前面training set的3个DE miRNA。

    3)pooled set:综合上述2个set,共计6个miRNA符合上述条件:6 miRNAs (hsa-miR-206、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-133a-3p、hsa-miR-144-5p、hsa-miR-144-3p和hsa-miR-184)。

    2、随机森林分类器鉴定SCZ诊断分子标志物:

    使用training set鉴定到一组11个miRNA,其AUC(Area Under Curve)为0.94 (95% CI, 0.88–1.0),敏感性0.783,特异性0.957。

    testing set中验证该组11个miRNA的敏感性为0.769,特异性为0.783,AUC 为0.753 (95% CI,0.61–0.90)。

    3、SCZ外泌体miRNA共表达??榉治觯?/p>

    上述pooled set(49个SCZ患者?vs?46个HC对照)进行miRNA WGCNA分析,共计鉴定到11个共表达的???,其中3个与疾病状态显著相关。

    4、DE miRNA以及SCZ相关miRNA共表达??榘谢蛲泛凸δ芨患治觯?/p>

    比如hsa-miR-206,其是SCZ患者的血液外泌体中最显著上调的miRNA,并且之前报道其调节脑源性神经营养因子BDNF表达。显著相关miRNA共表达??榘谢蛳灾患搅薕型聚糖的生物合成等通路,GO富集到了神经递质转运蛋白、树突棘和树突发育相关term。

    4、qRT-PCR验证DEmiRNA表达及其靶基因表达验证:

    qRT-PCR验证:100个SCZ患者(57例第一次发作未用药患者FEDF和43例长期治疗患者CT)vs?100个对照对于hsa-miR-206、hsa-miR-144-3p其验证结果与二代测序一致,且经过长期治疗在CT组其水平会向正常组趋近。靶基因表达和elisa结果显示SCZ患者血液中BDNF mRNA和蛋白质水平降低。greenyellow??橹邪谢騁ALNT8和GALNT15也显著降低。

    文献一:Zhao J, Li X, Hu J, et al. Mesenchymal Stromal Cell-Derived Exosomes Attenuate Myocardial Ischemia-Reperfusion Injury through miR-182-Regulated Macrophage Polarization[J]. Cardiovascular Research, 2019.

    下载:链接: https://pan.baidu.com/s/1qficU6O8O-xpv8ZCrqMlnw 提取码: 2nrh

    文献二:Du Y, Yu Y, Hu Y, et al. Genome-Wide, Integrative Analysis Implicates Exosome-Derived MicroRNA Dysregulation in Schizophrenia[J]. Schizophr Bull. 2019 Feb 16.

    下载:链接: https://pan.baidu.com/s/1BIzQ76znwBRt_AemCaHC_A 提取码: b6jy


     

    期望能给您的研究带来一些思路启发,如果您的科研项目问题,可以点击下方按钮咨询我们。

    最近文章
    qq游戏赢三张牌下载
  • 新疆铁路货运单日装车突破7000车大关 2019-04-09
  • 端午小长假杭州接待游客454.8万人次 9成民宿预订一空 2019-04-02
  • 溃疡恶变也会腹痛 这些肿瘤最容易被误诊 2019-03-27
  • 为藏药材可持续发展垦出“良田沃土” 2019-03-27
  • 吴尊送儿子上学晒自拍 父子颜值超高Max笑容灿烂 2019-03-24
  • 月薪3000男会计豪掷930万打赏 女主播该退钱吗? 2019-03-23
  • 我国成功组织航天员沙漠野外生存训练 2019-03-23
  • 网红健康险——红在哪 险在哪 2019-03-18
  • 升级是硬道理 MQB平台全新一代宝来驾乘体验更舒适 2019-03-18
  • 马特乌斯评德国队首战失利:“几乎什么都欠缺” 2019-03-02
  • 世界自然遗产旅行地中国国家地理网 2019-03-02
  • 计划经济走向完美,看搞好公有制计划经济存在不好说来看看?是统得太死还是要这样做才科学? 2019-02-17
  • 马思纯《我是大侦探》送礼物 吴磊:我们大老爷们好糙啊 2019-02-17
  • 回复@海之宁:不给你分配生产资料你咋尽所能? 2019-01-28
  • Conférence de presse du Premier ministre chinois 2019-01-28
  • 北京赛车改单是真是假 新加坡快乐8 澳洲幸运8彩票控 七乐彩走势图表近50期 体彩6+1走势图 博远棋牌 排列3第96期试机号 彩票投注手机软件 北京赛车是正规彩票吗 山东时时彩11选5开奖结果 领航时时彩 加拿大快乐8查询 欢乐生肖官网 福利彩票走势图 时时彩计划软件 西双版纳彩票大奖